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 Os meios de cultura, também conhecidos como meios de crescimento, são misturas específicas de nutrientes e outras substâncias que ajudam no crescimento de microrganismos, como bactérias e fungos (leveduras e bolores). Os meios de cultura são usados para testes de controle de qualidade de matérias-primas não estéreis e produtos acabados, bem como para testes de contaminação microbiana (esterilidade) em aplicações como monitoramento de higiene, validação do processo de esterilização e determinação da eficácia de agentes conservantes e antimicrobianos. Os testes de enumeração microbiana para produtos não estéreis são realizados de acordo com os procedimentos de teste harmonizados das farmacopeias da Europa, EUA e Japão. Esses testes, anteriormente conhecidos como Testes de Limite Microbiano (MLT), determinam a carga microbiológica da amostra do produto. Isso é obtido contando o número de unidades formadoras de colônias que cresceram no meio de cultura para um tamanho de amostra conhecido (UFC/g). Os critérios de aceitação são baseados na Contagem Total de Micróbios Aeróbicos (TAMC), na Contagem Total de Leveduras e Fungos (TYMC). Além disso, testes específicos são realizados para confirmar a presença ou ausência de certos microrganismos que podem ser indesejáveis. Os ingredientes do meio de cultura variam de acordo com o teste que está sendo realizado e o microrganismo de interesse. Mais comumente, os meios de cultura são baseados em um caldo nutritivo (líquido), muitas vezes misturado com ágar e preparado em placas de Petri (podem ser semissólidas ou sólidas). Para meios enriquecidos ou seletivos, são adicionados outros componentes específicos. A preparação do meio de cultura deve ser realizada com precisão para garantir que o crescimento microbiológico seja promovido corretamente. Os ingredientes individuais do meio de cultura (pós, géis e líquidos) devem ser pesados cuidadosamente de acordo com a receita de formulação do meio de cultura. Para os componentes principais, normalmente é utilizada uma balança de precisão com capacidade de resolução de 1 mg a 10 mg. Pode ser necessária uma balança analítica para pesar oligoelementos como cobre e zinco. Se for necessária uma quantidade menor de meio de cultura, deve-se tomar cuidado para recalcular corretamente as quantidades dos ingredientes; pode ser necessária uma balança com maior resolução para cumprir os requisitos de precisão. Assista ao Vídeo: Preparação de Meios de CulturaA preparação precisa do meio de cultura é essencial para garantir que o crescimento microbiológico seja apoiado corretamente. Assista ao vídeo para ver como as balanças de precisão XPR da METTLER TOLEDO não apenas ajudam a garantir que os meios de crescimento sejam formulados com precisão, mas também simplificam o processo para economizar tempo e esforço. Fluxo de Trabalho de Preparação de Meio de Cultura – Resumo de um POP TípicoA preparação de formulações de meios de cultura, incluindo meio de crescimento líquido e meio de cultura à base de ágar nutriente, é um procedimento comum em qualquer laboratório de microbiologia. O processo de formulação de meios de cultura envolve muitas etapas e deve ser realizado com cuidado para evitar contaminação cruzada e, em última instância, proteger a saúde dos consumidores.
Know-how de Testes de Controle de Qualidade MicrobianaTipos de testes de controle de qualidade microbiológica Dependendo do tipo de produto e sua finalidade, há três categorias principais de testes de controle de qualidade microbiana que requerem o uso de meios de crescimento:
Diretrizes para exame microbiano de produtos não estéreis Os procedimentos de teste de limites microbianos são realizados para determinar se um produto não estéril está em conformidade com as especificações fornecidas para a qualidade microbiana. Esses produtos não estéreis incluem produtos cosméticos, de saúde e farmacêuticos que podem ser ingeridos, aplicados topicamente ou inalados. A eficácia de tais produtos pode ser afetada ou mesmo eliminada pela presença de certos microrganismos; além disso, alguns microrganismos podem afetar adversamente a saúde do consumidor. Os testes de enumeração microbiana são uma série de testes que os fabricantes podem usar para ajudar a garantir que a carga microbiológica de seus produtos acabados permaneça dentro dos limites de segurança. Embora muitos países tenham suas próprias diretrizes para estabelecer a segurança de produtos não estéreis, há uma harmonização de importantes padrões nos mercados europeu, americano e japonês, conforme mostrado na tabela abaixo.
Diretrizes para teste de esterilidade de produtos estéreis O teste de esterilidade confirma que os produtos estão isentos da presença de microrganismos viáveis e é de vital importância para dispositivos médicos, produtos farmacêuticos, materiais de tecido e quaisquer outros materiais que se declarem estéreis ou livres de microrganismos viáveis. Além de identificar possível contaminação, o teste de esterilidade também é usado para determinar a eficácia antimicrobiana e validar os procedimentos de esterilização.
Precisa de Ajuda?Receitas de meios de cultura complexas, juntamente com um grande número de ingredientes, podem tornar a preparação de meios de cultura um procedimento demorado e trabalhoso. Entender bem o processo é essencial para garantir a segurança do consumidor. Se você precisar de apoio com a preparação de meios de cultura ou quiser conselhos sobre tópicos como conformidade com os POPs, eletrostática ou documentação e rastreabilidade, nossa equipe de especialistas está à sua disposição. Não hesite em entrar em contato conosco para obter ajuda ou orientação. Os Desafios da Preparação de Meios de CulturaOs meios de cultura e meios de crescimento geralmente consistem em mais de cinco ingredientes, às vezes até 30. Esses processos de formulação complexos exigem muito cuidado e atenção, e até mesmo o técnico de laboratório mais rápido pode precisar de 1,5 hora para preparar tal mistura. Cálculos de meios de cultura A receita de meio de cultura típica produz 1 litro de solução de meio de cultura. Quando é necessário um volume diferente de 1 litro, é preciso recalcular todas as quantidades de ingredientes de acordo e registrar todos os novos valores. Qualquer erro nos cálculos ou no registro dos novos valores pode resultar em um meio de cultura que não funciona conforme o necessário, podendo levar a consequências graves. Resultados de pesagem e registro de peso Ao seguir uma receita de meio de cultura ou os valores recalculados, o técnico de laboratório deve ter a certeza de que foi usada a quantidade certa de cada ingrediente e de que todos os ingredientes realmente foram adicionados. Muitas vezes, isso pode significar marcar os ingredientes de uma lista à medida que são pesados. Deve-se ter cuidado para evitar erros de transcrição ao registrar os pesos reais ou ao transferi-los para um computador. O uso de duas balanças no processo de preparação dos meios de cultura aumenta a complexidade, reduz a eficiência e aumenta o risco de erros. Influências da pesagem Os ingredientes do meio de cultura podem ser pesados em uma variedade de recipientes diferentes, desde barcos para pesagem até béqueres de cinco litros. Todos os recipientes, bem como a própria balança, podem estar sujeitos a influências externas, por ex. movimento do ar, cargas eletrostáticas ou o campo magnético de um agitador, o que pode dar origem a dificuldades como tarar a balança, leituras flutuantes e instáveis e tempos de estabilização mais longos. Tais desafios estendem o tempo para fazer o meio de cultura, afetando a produtividade. As dificuldades de pesagem em um gabinete de segurança ou capela fluxo laminar Os efeitos do movimento do ar dentro de um gabinete de segurança ou capela fluxo laminar podem ser atenuados com o uso de um protetor de vento para proteger a balança e o recipiente. Embora um protetor de vento seja uma excelente maneira de evitar erros de pesagem, há algumas desvantagens práticas:
Documentação Não apenas os meios de cultura devem ser totalmente rotulados para evitar qualquer confusão, mas todos os dados relacionados aos meios de cultura devem ser registrados e armazenados com segurança para referência futura e rastreabilidade. O tratamento manual de grandes quantidades de dados é demorado e apresenta um alto risco de erro. A Solução de Destaque da METTLER TOLEDO para a Preparação Prática e Precisa de Meios de CulturaAs Balanças de Precisão XPR da METTLER TOLEDO oferecem um alto nível de precisão e abordam muitos dos desafios da preparação de meios de cultura, simplificando processos e reduzindo a carga de trabalho dos técnicos de laboratório. Com resoluções de 0,1 mg a 100 mg e capacidade de até 10 kg, as Balanças de Precisão XPR são perfeitas para uma ampla variedade de aplicações de preparação de meios de cultura. Receitas diretamente na balança Até 50 receitas de preparação de meios de cultura podem ser salvas na balança como métodos de pesagem, permitindo que os técnicos acessem rapidamente a receita necessária e comecem a trabalhar. Instruções passo a passo são fornecidas no visor da balança para que os técnicos possam acompanhar facilmente em que ponto eles se encontram no processo de preparação do meio de cultura. Cálculos automáticos e armazenamento de resultados No início da receita do meio de cultura, o técnico simplesmente digita o volume necessário e as quantidades dos ingredientes são recalculadas automaticamente. A balança avisa o técnico para pesar cada ingrediente, salva o resultado do peso real e tara automaticamente antes que o próximo ingrediente seja adicionado. Não há necessidade de registrar os resultados manualmente e os resultados podem ser impressos automaticamente no final. Sem necessidade de protetor de vento Todas as Balanças de Precisão XPR são equipadas com o prato de pesagem SmartPan™. O SmartPan oferece uma estabilidade extraordinária, minimizando os efeitos das correntes de ar na célula de pesagem, tornando possível pesar com resolução de 1 mg sem um protetor de vento. O SmartPan permite que os resultados sejam entregues duas vezes mais rápido que em um prato de pesagem padrão. • Limpeza fácil Equipamentos limpos são essenciais para reduzir o risco de contaminação cruzada. O prato de pesagem SmartPan retém qualquer derramamento na base do prato, permitindo o descarte seguro. O prato e a base são facilmente removidos para limpeza em uma máquina de lavar louça. A capa protetora no corpo protege a balança, ajudando a evitar que respingos entrem na célula de pesagem, e sua superfície lisa é fácil de limpar e evita o acúmulo de sujeira. Tampas quimicamente resistentes estão disponíveis para o visor da balança, que podem ser simplesmente levantadas após o uso e descartadas para evitar contaminação cruzada. Formulação Eficiente de Meios de CulturaVocê já quis que os processos de pesagem e documentação para formulação de meios fossem menos complicados? O desafio de reproduzir a formulação otimizada de meios é familiar para você? Leia o nosso guia e saiba como instrumentos e acessórios personalizados podem ajudar um laboratório de P&D a garantir um alto grau de confiabilidade de pesagem, consistência do meio, economia geral e qualidade do produto para seus processos de formulação. Preparação de Meios de Cultura – Otimização do Fluxo de Trabalho e Gerenciamento Abrangente de DadosAs Balanças de Precisão XPR da METTLER TOLEDO podem ser conectadas ao nosso software de laboratório LabX para criar uma solução completa de fluxo de trabalho que oferece recursos abrangentes de gerenciamento de dados. Um banco de dados centralizado fornece a todos os usuários conectados acesso aos mesmos POPs para preparação de meios de cultura, garantindo que cada técnico siga os mesmos procedimentos. O software cuida automaticamente de todos os cálculos e informações do processo. Os resultados são salvos com segurança no banco de dados e podem ser acessados a qualquer momento para análise posterior e geração de relatórios. O software praticamente elimina a necessidade de registro manual de dados – até mesmo etiquetas detalhadas podem ser impressas automaticamente. A solução pode ser integrada aos sistemas ERP/LIMS existentes, permitindo a transferência bidirecional de receitas e resultados. Instrumentos, tarefas e usuários podem ser gerenciados de forma centralizada; os gerentes de laboratório podem monitorar o progresso das tarefas ao vivo sem a necessidade de estar presente no laboratório. Para ambientes altamente regulamentados, o software ajuda a atender aos requisitos de integridade de dados FDA ALCOA+. Como Medir o pH dos Meios de CulturaNão importa se você apenas precisa de medições de pH rápidas e confiáveis ou se está cumprindo regulamentos rigorosos — a METTLER TOLEDO pode ajudá-lo. A linha mais avançada SevenExcellence oferece uma operação intuitiva com a tela touchscreen OneClick™, permitindo que métodos salvos sejam iniciados diretamente de um atalho na tela inicial. O gerenciamento inteligente do sensor garante que seus eletrodos de pH estejam sempre nas melhores condições para resultados precisos. A linha Seven Excellence pode ser conectada ao LabX para garantir a rastreabilidade e integridade dos dados. Para medições de pH em superfícies planas como placas de ágar, são recomendados eletrodos de superfície especializados como o InLab Surface Pro-ISM. Publicações Balanças de PrecisãoNossas balanças de precisão altamente versáteis oferecem capacidade de até 64 kg e resolução de 1 mg, para resultados de pesagem precisos e confiáveis para laboratório e para produ... Software LabX BalanceO software LabX™ Balance oferece controle central de instrumentos, tarefas e usuários, orientação do POP no terminal da balança e eliminação da transcrição manual. Instrumentos de pH para LaboratórioSistemas de eletroquímica fornecem medições precisas de pH, condutividade, íons, ORP e oxigênio dissolvido para aplicações em campo e laboratório. 1. Qual é a maneira mais fácil de recalcular as quantidades da receita quando a quantidade-alvo não é 1 litro?Para evitar o risco de erros, a melhor maneira de recalcular os erros é por meio eletrônico. Se as quantidades da receita estiverem disponíveis em uma planilha, os novos valores podem ser calculados rapidamente. Ao usar uma Balança de Precisão XPR, você pode configurar o método de formulação do meio de cultura para solicitar que você digite o volume necessário e as quantidades pretendidas serão calculadas automaticamente. A balança solicitará as quantidades necessárias. 2. Como posso ter certeza de que os pesos dos ingredientes estão dentro da tolerância?As tolerâncias de pesagem devem ser definidas no POP de preparação de meios de cultura. Elas podem ser especificadas com precisão ou dadas como uma porcentagem. Se você precisar alterar o volume da receita, há o desafio adicional de também recalcular os limites de peso superior e inferior relacionados às tolerâncias. Com as Balanças de Precisão XPR, as tolerâncias são incluídas como uma porcentagem quando a receita do meio de cultura é criada. Os limites de peso superior e inferior são calculados automaticamente para qualquer volume-alvo. O guia de pesagem integrado o ajuda a dosar de acordo com o alvo, exibindo em verde se você estiver dentro da faixa de tolerância. 3. Minha receita de meio de cultura é impressa como uma lista de ingredientes. Qual é o melhor jeito de acompanhar em que ponto me encontro no processo?A maneira mais simples é organizar os ingredientes dos meios de cultura de acordo com a lista e marcá-los um por um à medida que os adiciona. No entanto, este processo deve ser realizado de forma diligente para evitar erros. Ao salvar seu POP do meio de cultura como um método em sua balança XPR, a balança solicitará a você cada ingrediente por nome e com a quantidade necessária. Depois de pesar o ingrediente, o resultado do peso e o nome do ingrediente são salvos automaticamente no protocolo de resultados integrado que você pode ver a qualquer momento. A balança tara automaticamente e solicita o próximo ingrediente. 4. No nosso laboratório de microbiologia, anotamos os pesos reais dos ingredientes à mão. Como podemos evitar erros e acelerar o processo?Em nossas balanças XPR, os pesos dos ingredientes do meio de cultura são salvos automaticamente no protocolo de resultados integrado e podem ser visualizados a qualquer momento. Os resultados finais podem ser impressos ou transferidos para um computador. 5. Qual é a melhor balança para preparar meios de cultura?A melhor balança depende da aplicação e dos requisitos de precisão. Ao escolher sua balança, você precisa considerar:
Em termos de metrologia, essas considerações são necessárias para definir os requisitos de peso mínimo, a capacidade da balança e a faixa de pesagem segura. O serviço gratuito GWP® Recommendation(Recomendação de GWP) da METTLER TOLEDO ajuda você a escolher a balança ideal para suas necessidades e determina se a balança existente é adequada para a finalidade. 6. Como podemos garantir a conformidade com os regulamentos?As balanças XPR têm funções integradas de garantia de qualidade para que você possa ter certeza de que a balança está nivelada e que os testes de rotina estão atualizados antes de começar a pesar. O status da balança é indicado pela StatusLight™ integrada na frente do terminal da balança. De relance, você pode ver que verde significa que é seguro pesar, amarelo é um aviso e os erros são mostrados em vermelho. A biblioteca de testes de rotina integrada contém modelos personalizáveis para testes de excentricidade, repetibilidade e sensibilidade. Um registro de todos os testes de rotina é mantido para fornecer rastreabilidade. O Software de laboratório LabX fornece suporte máximo para conformidade. Ao implantar os POPs no LabX, você pode ter a certeza de que todos os usuários seguirão os mesmos procedimentos para preparar meios de cultura. O software também pode gerenciar todas as funções de garantia de qualidade, incluindo a programação de testes de rotina e o bloqueio do uso da balança, se necessário. Todos os resultados e informações do processo são salvos com segurança em um banco de dados central para garantir a rastreabilidade e auxiliar na conformidade com o FDA CFR parte 11. 7) Ao preparar meios de cultura, às vezes temos problemas com nossas balanças e a reprodutibilidade é deficiente. O que podemos fazer?Quando uma balança não se estabiliza, há uma grande chance de que a célula de pesagem esteja sendo influenciada por cargas eletrostáticas ou correntes de ar. Pode haver acúmulo de cargas eletrostáticas em recipientes e amostras mesmo quando manuseadas corretamente; portanto, você não está fazendo nada de errado. Às vezes, a balança consegue se estabilizar, mas o valor do peso exibido na balança pode não ser a quantidade real da substância adicionada. Isso poderia explicar essa reprodutibilidade deficiente. Para remover cargas eletrostáticas dos recipientes e amostras, podem ser colocados ionizadores independentes ao lado da balança. Problemas de estabilização também podem surgir com o uso de um gabinete de segurança ou capela fluxo laminar. Em tais ambientes, correntes de ar de fluxo turbulento ou laminar podem aplicar uma força na célula de pesagem, evitando que a balança se estabilize e afetando a repetibilidade. O prato de pesagem SmartPan nas Balanças de Precisão XPR minimiza os efeitos de correntes de ar na célula de pesagem. O SmartPan oferece maior estabilidade do que um prato de pesagem padrão, permitindo que os resultados sejam entregues duas vezes mais rápido e melhorando a repetibilidade. 8) Como podemos garantir que os meios de cultura sejam rotulados corretamente com todas as informações necessárias?As balanças XPR têm funções integradas para configurar etiquetas de amostra com todas as informações de que você precisa, incluindo cálculo automático da data de validade. Até mesmo códigos de barras podem ser adicionados. A etiqueta pode ser impressa automaticamente no final do procedimento de preparação do meio de cultura. As etiquetas METTLER TOLEDO resistem às temperaturas dos processos de esterilização em autoclave. 9) Alguns dos ingredientes dos meios de cultura têm cores semelhantes. Como posso ter certeza de que não adicionei o mesmo ingrediente duas vezes?Uma boa ideia é incluir etiquetas de código de barras nos ingredientes para identificar cada amostra de forma exclusiva. As balanças XPR são compatíveis com leitores de código de barras. O código de barras do ingrediente é escaneado antes que ele seja adicionado à mistura do meio de cultura para facilitar a verificação de que foi adicionado o ingrediente correto. Ao conectar sua balança XPR ao LabX, um aviso será exibido caso você digitalize o mesmo código de barras, impossibilitando a adição duplicada de um mesmo ingrediente. 10. Temos um banco de dados de ingredientes de meios de cultura em nosso LIMS. Como posso transferir as informações de que preciso para a balança?Quando uma balança não se estabiliza, há uma grande chance de que a célula de pesagem esteja sendo influenciada por cargas eletrostáticas ou correntes de ar. Pode haver acúmulo de cargas eletrostáticas em recipientes e amostras mesmo quando manuseadas corretamente; portanto, você não está fazendo nada de errado. Às vezes a balança consegue se estabilizar, mas o valor do peso exibido na balança pode não ser a quantidade real da substância adicionada. Isso poderia explicar essa reprodutibilidade deficiente. Para remover cargas eletrostáticas dos recipientes e amostras, podem ser colocados ionizadores independentes ao lado da balança. Problemas de estabilização também podem surgir com o uso de um gabinete de segurança ou capela fluxo laminar. Em tais ambientes, correntes de ar de fluxo turbulento ou laminar podem aplicar uma força na célula de pesagem, evitando que a balança se estabilize e afetando a repetibilidade. O prato de pesagem SmartPan nas Balanças de Precisão XPR minimiza os efeitos de correntes de ar na célula de pesagem. O SmartPan oferece maior estabilidade do que um prato de pesagem padrão, permitindo que os resultados sejam entregues duas vezes mais rápido e melhorando a repetibilidade. Quais os meios de cultura são indicados como base para análise de esterilidade?5.1 Controle da esterilidade dos meios de cultura
Devem ser amostrados 10% de cada lote de fluído tioglicolato, caldo caseína de soja, água peptonada e solução salina produzidos, para comprovação da esterilidade. Essas amostras são incubadas nas mesmas condições de temperatura do ensaio por 14 dias.
Quais os testes de esterilidade?Existem dois métodos recomendados de testes de esterilidade para produtos farmacêuticos: filtração por membrana e inoculação direta.
Como deve ser realizado o teste de esterilização do meio de cultura?Preparar diluição da amostra a 10% utilizando um agente emulsificante adequado adicionado a um diluente estéril como o Líquido A. Transferir a amostra diluída para meios de cultura sem emulsificante. Incubar os meios inoculados por, no mínimo, 14 dias. Observar os meios durante todo o período de incubação.
Qual a finalidade dos testes de esterilidade?O teste de esterilidade é o teste realizado para detectar microrganismos contaminantes em produtos que já sofreram tratamento esterilizante. Ele é a demonstração de que um produto é estéril por meio da realização de um ensaio microbiológico, em amostras de determinado lote.
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Quais são os meios de cultura utilizados em um teste de esterilidade?
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